Культивирование эмбрионов до состояния бластоцисты
Культивирование эмбрионов в лабораторных условиях до стадии бластоцисты рекомендуется женщинам до 36 лет, так как у них достаточно хороший овариальный резерв, а также тем, у кого много фолликулов в одном цикле.
Раньше перенос зародышей выполнялся на 2-й или 3-й день после инсеминации. Теперь доктора предпочитают дожидаться более позднего этапа развития. Культивирование полученных эмбрионов до стадии здоровой бластоцисты позволяет отобрать для подсадки зародыши с наилучшими количественными и качественными показателями. На этой стадии деления уже насчитывается 6–8 клеток.
Культивирование эмбрионов врачами до стадии бластоцисты дает 35 % подходящего биоматериала от начального объема. Статистика усреднена, и поэтому результат может быть как лучше, так и хуже в сложных клинических случаях. При достаточном количестве часть из них можно сохранить на будущее (при планировании второго ребенка). Это услуга называется криоконсервацией и подходит для использования биоматериала через неопределенный период времени.
Культивирование эмбрионов до стадии бластоцисты и проверочные исследования
Перед имплантацией эмбриолог проверяет клеточную жизнеспособность по морфологическим критериям. Для каждого этапа развития (и также дня) разные критерии оценки. Отбираются только самые перспективные.
Эффективная система градации содержит числовые и буквенные обозначения и основана на определении внутриклеточной массы, степени зрелости и диагностике трофэктодермы.
Долгое время оценку и отбор для трансплантации проводили до трех суток роста. Но после того как появилась возможность продлить процесс до 4–6 суток, стало очевидным, что при ранней проверке результаты весьма ненадежны. Каждый день делает характеристики зиготы более показательными. В целом это улучшает тактику ведения повторных процедур и эффективность криопротоколов.
Культивирование эмбрионов в лаборатории до стадии бластоцисты: условия для содержания
Оплодотворенные яйцеклетки содержатся в маркированных планшетах, чашках Петри или Нунка, которые, в свою очередь, помещаются в инкубаторы. Культуральной (питательной) средой, в которой содержатся ооциты, обеспечивается насыщение аминокислотами, сывороточным протеином, необходимыми энергетическими соединениями (пировиноградная и молочная кислоты, глюкоза), физиологическими элементами (хлор, калий, магний, кальций, натрий и др.). Поддерживается температура в 37°C, влажность до 99 % и доля СО2 до 5 %.
Культуральный субстрат по своему составу и температуре сходен с состоянием полости матки и фаллопиевых труб. Он разрабатывается в эмбриологических лабораториях. Эмбриолог поддерживает постоянство питательной жидкости и ежедневно ее обновляет.
Инновационные разработки сред для содержания позволили значительно повысить вероятность успешного зачатия при культивировании лучших эмбрионов до стадии здоровой бластоцисты. Современными специализированными центрами репродуктивной помощи используется продукция производителей Medi-Cult и Cook.
Успешное культивирование до бластоцисты также зависит от использования специального мультигазового инкубатора. Признанными в мире производителями считаются фирмы Sanyo и Galaxy.
Культивирование лучших эмбрионов: дополнительные действия
Культивирование полученных эмбрионов до нужной стадии с вспомогательным хетчингом проводят для повышения их качества. Он помогает при дефектах вителлиновой оболочки, экстенсивной фрагментации и клеточных изменениях после расконсервации.
Процедура предполагает аккуратное рассечение вителлинового слоя зиготы. Образование маленького отверстия, нарушение стабильности или ослабление оболочки повышают шансы на благополучную имплантацию.
Существует два способа вспомогательной инкубации: лазерная коррекция и раствор Тироде. Первый создается с уровнем кислотности 2,5. Применяя его, действуют очень осторожно, так как неправильное воздействие может довести до разрушения биокомпонентов. Кислотный раствор наносят пипеткой на область рядом с вителлиновым слоем. После появления отверстия выполняется аспирация, чтобы кислота не проникла в перивителлиновую зону. После 2–3 манипуляций проводится промывание, а затем продолжается культивирование до стадии жизнеспособной бластоцисты.
В некоторых медицинских учреждениях предпочтение отдают лазеру. Но для него тоже есть риски: мутагенное и термальное воздействие.
Криоперенос после культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты
Если при инсеминации было большое количество клеток хорошего качества, они могут быть заморожены и использованы в будущем при неудачной первой попытке или повторном зачатии. Криозаморозку можно выполнять сразу после или на 6-й день.
Для трансплантации после криоконсервации матке женщины требуется специальная подготовка (без стимуляции яичников и пункций). Дополнительное стимулирование эмбрионов до бластоцисты не нужно. При нормальном цикле овуляции у пациентки перенос осуществляется на 7–10 день после его начала. Если есть проблемы, то предварительно назначается курс гормональных препаратов.
Культивирование, которое выполняется для эмбрионов до стадии полноценной бластоцисты с последующей криоконсервацией, дает шанс на беременность немного ниже, чем при обычной пересадке. Однако он вселяет надежду пациенткам, которые перенесли какие-либо заболевания в прошлом.
